超高效液相色谱分析局限性探讨

尽管UPLC能显著减少复杂样品的分析分离时间，提高检测的灵敏度和分离度，但目前UPLC的使用仍然存在局限性，其普及应用可能仍然需要一些时间。

1、与UPLC匹配的色谱柱比较少

UPLC是应小粒径(小于2Lm)柱填料的需求而专门设计的耐高压液相色谱系统，因此使用小粒填料的色谱柱能够最大限度地发挥UPLC高分离度和高灵敏度的优势。但是这种色谱柱要能够耐受由于粒径减小而带来的高反压，而且粒径的减小也给色谱柱充填技术带来了挑战。作为首家UPLC仪器开发商的Waters公司目前也只能提供有限型号的色谱柱(BEHC18ACQ，BEHShieldRP18ACQS，C8和苯基键合固定相等)。可喜的是，各大公司已在努力开发小粒径填料色谱柱。NguyenDT等比较了已经上市的粒径小于2Lm的色谱柱性能，如Agilent公司的ZorbaxEclipseXDBC18(1.8Lm)，ZorbaxExtendC18(1.8Lm)，ZorbaxStableBondC18(1.8Lm)以及ThermoElectron公司的HypersilGOLDC18HYP(1.9Lm)等。这些色谱柱均能发挥小粒径填料的优势，且各有所长。随着色谱填料技术的不断革新，UPLC色谱柱型号缺乏的问题应该是可以克服的。

2、峰面积的重复性欠佳

NovdkovL等发现，UPLC分析样品时峰面积的重复性略逊于HPLC，特别是低浓度样品时更加明显，其峰面积重复性的RSD约为HPLC的2倍。研究者认为，可能因UPLC的进样量过少(仅有2Ll)，或者由于采用了半环(partialloop)进样的方式，理论上这种进样方式的精密度不如全环(fuIllop)进样。通过稀释样品，增加注入样品的体积，可以改善这种状况。

3、对高频检测仪器的需要

UPLC分离样品色谱峰扩展很小，通常峰底宽度只有几秒钟，低浓度的样品峰则更窄。Connor等发现，使用UPLC测定低浓度样品时，准确度、精密度都比较差。这可能是由于检测仪器探测频率比较低，检测低浓度样品时出现了样品点的遗漏。因此，随着UPLC的开发应用，必将推动高频检测仪器的进一步发展。