高效液相色谱名词解释系列之二关于洗脱

 

本文将针对液相色谱的洗脱过程，来阐述洗脱过程中所应用到的一些知识以及名词术语，以及这些属于所代表的真正含义。

洗脱效率(Efficiency)

一种衡量样品通过填料床时色谱柱阻止样品谱带扩散的能力的方式。一个有效的色谱柱能最小化谱带分散或谱带扩散。对于有效分离，更高灵敏度，和/或复杂样品混合物中相似组分鉴定来说，高效至关重要。

诺贝尔奖获得者Martin和Synge，从蒸馏引申出塔板(H,或H.E.T.P.,理论塔板高度)的概念，用来衡量色谱效率和比较柱性能。就像是后来的高效液相色谱和超高效液相色谱技术，他们意识到填有最小粒径(要求更高压力)的均一填料床是获得最大效率的关键。影响谱带扩散的色谱柱和分离系统参数之间的关系在之后的vanDeemter方程中有描述。

色谱法常指一种容易计算并可直接从色谱测量得到的作为效率的数，即塔板数(N)。塔板高度由色谱柱床长度与塔板数N(H=L/N;从色谱图中计算N的方法如图U所示)的比值而得。值得注意的是N或H的计算方法只有在等压条件下方可使用，不能在梯度分离时使用。

洗脱物(Eluate)

从色谱柱出口流出含有被分析物的液体部分。在分析型高效液相色谱,洗脱物的浓度或其中分析物的分子量由检测器测量。在制备型高效液相色谱中,洗脱物按照均一的时间或体积间隔被连续收集，或者在检测器显示感兴趣目标存在时不连续收集。这些组分随后将处理得到纯化合物。

洗脱液(Eluent)

液相色谱的流动相。

洗脱顺序(EluotropicSeries)

参照在一个标准吸附剂上的特定分析物，溶剂按洗脱强度排序。当开发等度和梯度洗脱方法时，这种顺序很有用。Trappe在利用自低而高的溶剂极性强度序列在矾土上分离油脂组分后创造了这个名词。后来，Snyder测量了众多溶剂的强度在正相LC吸附剂上的参数并将其列在表格中。Neher创造了一个很有用的表图，从中可以选择正相溶剂的同等洗脱(相同洗脱强度)混合物来优化薄层色谱TLC分离的选择性。

一个典型的正相洗脱顺序可以从弱端的非极性脂肪族碳水化合物开始，即戊烷或己烷，之后进一步到苯(芳香族碳水化合物)，二氯甲烷(氯化物)，二乙醚，乙酸乙酯(酯类)，丙酮(酮类)，最后，甲醇(醇类)在最强端。

洗脱(Elute)

用洗提色谱法分离，当所有样品组分还在色谱填料床中，洗脱过程可以中止(平面薄层或纸层析)或连续操作直到组分已经离开色谱填料床(柱色谱)。

洗脱色谱(ElutionChromatography)

流动相连续通过填料床的色谱分离过程。在高效液相色谱中，一旦检测器基线稳定，分离系统达到平衡，一定量的样品被注射入流动相。直到所有目标分析物都通过检测器，洗脱过程才停止。

洗脱强度(ElutionStrength)

相对于固定相上的分析物的溶剂亲和性的衡量方法。一个弱溶剂不能替换分析物，使分析物较强地保留在固定相上。一个强溶剂可以完全替换并携带所有分析物分子无保留地通过色谱柱。为了获得有效分离和合理洗脱体积的适当平衡。HPLC溶剂经常被掺杂造成两相间的竞争，对特定分析物达到优化选择性和分离时间的目的。

偶极，介电常数，氢键，分子大小和形状以及表面张力都影响到洗脱强度。洗脱强度也由分离模式决定。在吸附或正相条件下，溶剂的洗脱顺序可能由低到高排列，而在反相分离条件下，这个顺序可能几乎相反。